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    原理：

    細胞接種存活率只表示接種細胞后貼壁的細胞數，但貼壁后的細胞不一定每個(gè)都能增殖和形成克隆。而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞。克隆形成率反應細胞群體依賴(lài)性和增殖能力兩個(gè)重要性狀。由于細胞生物學(xué)性狀不同，細胞克隆形成率差別也很大，一般初代培養細胞克隆形成率弱，傳代細胞系強；二倍體細胞克隆形成率弱，轉化細胞系強；正常細胞克隆形成率弱，腫瘤細胞強。并且克隆形成率與接種密度有一定關(guān)系，做克隆形成率測定時(shí)，接種細胞一定要分散成單細胞懸液，直接接種在碟皿中，持續一周，隨時(shí)檢查，到細胞形成克隆時(shí)終止培養。

    基本步驟：

    （1）取對數生長(cháng)期細胞，用0.25%胰蛋白酶消化并輕輕吹打，使之成為單細胞，作活細胞計數，用含20%胎牛血清的DMEM培養液調整細胞密度至1×106細胞/L。然后根據實(shí)驗要求作梯度倍數稀釋。

    （2）用蒸餾水分別制備出1.2%和0.7%兩個(gè)濃度的低溶點(diǎn)瓊脂糖液，高壓滅菌后，維持在40℃中不會(huì )凝固。

    （3）按1:1比例使1.2%的瓊脂糖和2×DMEM培養基（含有2×抗生素和20%的小牛血清）混合后，取3mL混合液注入直徑6cm平皿中（10cm平皿加7～10mL），冷卻凝固，可作底層瓊脂置CO2溫箱中備用。

    （4）按1:1比例讓0.7%的瓊脂糖和2×DMEM培養基在無(wú)菌試管中相混以后，再向管中加入0.2mL的細胞懸液，充分混勻，注入鋪有1.2%瓊脂糖底層平皿中，逐形成雙瓊脂層。待上層瓊脂凝固后，置入37℃ 5%CO2溫箱中培養10～14天。

    （5）把平皿放置在倒置顯微鏡下，觀(guān)察細胞克隆數。計算形成率。

    軟瓊脂培養法常用檢測腫瘤細胞和轉化細胞系。試驗中瓊脂與細胞相混時(shí)，瓊脂溫度不宜超過(guò)40℃。接種細胞的密度每平方厘米不超過(guò)35個(gè)，一般6cm的平皿接種1000個(gè)細胞。正常細胞在懸浮狀態(tài)下不能增殖，不適用于軟瓊脂克隆形成試驗。